1.适用范围
本方法适用于各类食品中淀粉的测定。
本方法最低检出限量为0.09μg(淀粉)/mL(试液)。
2.原理概要
淀粉在淀粉葡萄糖苷酶(AGS)催化下,最终水解为葡萄糖。葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下,催化β-D-葡萄糖(葡萄糖水溶液)氧化,生成D-葡萄糖酸-δ-内酯和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化,过氧化氢与4-氨基安替比林和苯酚生成红色醌亚胺。在505nm波长处测醌亚胺的吸光度,计算食品中淀粉的含量。
3.主要仪器和试剂
3.1试剂
3.1.1组合试剂盒
1号瓶:内含淀粉葡萄糖苷酶200U(活力单位)、柠檬酸、柠檬酸三钠;
2号瓶:内含0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.0)200mL,其中含4-氨基安替比林为0.00154mol/L;
3号瓶:内含0.022mol/L苯酚溶液200mL;
4号瓶:内含葡萄糖氧化酶800U(活力单位)、过氧化物酶2000U(活力单位)。
1、2、3、4号瓶须在4℃左右保存。
3.1.2酶试剂溶液
3.1.2.1 将1号瓶中的物质用重蒸馏水溶解,使其体积为66mL。轻轻摇动(勿剧烈摇动),使酶完全溶解。此溶液即为淀粉葡萄糖苷酶试剂溶液,其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为0.1mol/L,pH=4.6。在4℃左右保存,有效期1个月。
3.1.2.2 将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。
3.1.2.3 将4号瓶中的酶溶解在(3.1.2.2)混合液中,轻轻摇动(勿剧烈摇动),使酶完全溶解,即葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液。在4℃左右保存,有效期1个月。
3.1.3 二甲基亚砜。
3.1.4 6mol/L盐酸溶液。:
3.1.5 6mol/L氢氧化钠溶液:称取24g氢氧化钠,溶于1000mL重蒸馏水中,摇匀。
3.1.6 淀粉标准溶液:称取经100±2℃干燥2h的可溶性淀粉0.2000g,溶于少量60℃重蒸馏水中,冷却后定容至100mL,摇匀。将此溶液用重蒸馏水稀释V10.00→V100,即200μg/mL淀粉标准溶液。
3.2仪器
实验室常规仪器及下列各项:
3.2.1 研钵或粉碎机。
3.2.2 分析筛。
3.2.3 组织捣碎机。
3.2.4 恒温水浴锅。
3.2.5 可见光分光光度计。
3.2.6 酸度计或pH计。
3.2.7 微量移液管:1.00mL,精度0.01mL。
4.试样和试液的制备
4.1.固体样品
粉末状样品:取有代表性的样品至少200g,混匀,置于密闭的玻璃容器内。
颗粒状样品:取有代表性的样品至少200g,用粉碎机粉碎,或用研钵研细,通过100目分析筛,置于密闭的玻璃容器内。
4.2.糊状样品
取有代表性的样品至少200 g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内。
4.3.固液体样品
取有代表性的样品至少200 g,用组织捣碎机捣碎,置于密闭的玻璃容器内。
4.4.液体样品
取有代表性的样品至少200g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内。
4.5.试液的制备
用100mL三角瓶称取试样(5.1~5.4)0.2~2g(精确至0.0001g),加入20mL二甲基亚砜和6mol/L盐酸溶液5mL,于60±1℃水浴锅中加热30min(每隔5min摇动一次)。冷却至室温后,用6mol/L氢氧化钠溶液(3.5)和酸度计调整pH值至4.6左右。将溶液转移到250mL容量瓶中,用重蒸馏水定容至刻度,摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初滤液30mL,即为试液。试液中淀粉含量高于1000μg/mL时,可以适当增加定容体积。
5.分析步骤
5.1标准曲线的绘制
用微量移液管吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00mL淀粉标准溶液(3.1.6),分别置于10mL比色管中,各加入1mL淀粉葡萄糖苷酶试剂溶液(3.1.2.1),摇匀,于58±2℃水浴锅中恒温20min。冷却至室温,加入3mL葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液(3.1.2.3),摇匀,在36±1℃水浴锅中恒温40min。冷却至室温,用重蒸馏水定容至10mL,摇匀。用1cm比色皿,以淀粉标准溶液含量为0.00的试剂溶液调整分光光度计的零点,在波长505nm处测定各比色管中溶液的吸光度。
以淀粉含量为纵坐标,吸光度为横坐标,绘制标准曲线。
5.2试液吸光度的测定
用微量移液管吸取0.20~2.00mL试液(4)(依试液中淀粉的含量而定),置于10mL比色管中。以下按5.1步骤操作;但须用等量试液(4)调整分光光度计的零点。测出试液吸光度后,在标准曲线上查出对应的淀粉含量。
6.结果计算
食品中淀粉的含量以质量百分率表示,按式(1)计算:
V1—试液的定容体积,mL;
V2—测定时吸取试液的体积,mL。
计算结果精确至小数点后第二位。
7.允许差
同一样品的两次测定值之差,不得超过两次测定平均值的5.0%。
内容仅供参考