1 范围

    本方法适用于茶叶中有机磷农药及氨基甲酸酯农药残留的测定。

    2 原理

    有机磷农药及氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的活性有抑制作用，在一定条件下，其抑制率取决于农药种类及其含量。

    在pH8的溶液中，碘化硫代乙酰胆碱被胆碱酯酶水解，生成硫代胆碱。硫代胆碱具有还原性，能使蓝色的2，6-二氯靛酚褪色，褪色程度与胆碱酯酶活性正相关，可在600nm比色测定，酶活性愈高时，吸光度值愈低。当样品提取液中有一定量的有机磷农药或氨基甲酸酯类农药存在时，酶活性受到抑制，吸光度值则较高。据此可判断样品中有机磷农药或氨基甲酸酯农药的残留情况。样品提取液用氧化剂氧化，可提高某些有机磷农药的抑制率，因而可提高其测定灵敏度，过量的氧化剂再用还原剂还原，以免干扰测定。

    3 试剂

    3.1 底物溶液：碘化硫代乙酰胆碱水溶液（1+49），1g碘化硫代乙酰胆碱，加缓冲液溶解并定溶至50mL。

    3.2 缓冲液：pH8的三羟甲基氨基甲烷（Tris）-盐酸缓冲液：50mL 0.1mol/L Tris 加29.2mL 0.1mol/L盐酸加水定溶至100mL。

    3.3 显色剂：0.04%2,6-二氯靛酚水溶液（1+2499）。

    3.4 氧化剂：次氯酸钙水溶液（1+199）。

    3.5 还原剂：亚硝酸钠水溶液（1+9）。

    3.6 胆碱酯酶液：0.2g酶粉加10mL缓冲液溶解。。

    3.7 脱色剂：活性炭。

    3.8 丙酮：分析纯。

    3.9 碳酸钙：分析纯。

    4 仪器设备

    分光光度计。

    5 样品测定

    5.1 样品提取

    取0.5g茶置于10mL烧杯中,加5mL丙酮浸泡5min,不时振摇,再加0.2g碳酸钙。

    注：以上操作应在15~35℃温度下进行。

    5.2 氧化

    取0.5mL丙酮提取液于5mL 烧杯中,吹干后加0.3mL缓冲液溶解。加入氧化剂0.1mL,摇匀后放置10min。再加入还原剂0.3mL,摇匀。

    5.3 酶解

    加入酶液0.2mL ,摇匀,放置10min,再加入底物溶液0.2mL,显色剂0.1mL,放置5min后测定。

    5.4 测定

    分光光度计波长调至600nm,其他按常规操作,读取测定值。

    6 结果

    6.1 测定结果的使用

    当测定值在1.0以下时,为未检出。

    当测定值在1.0~1.3之间时,为可能检出,但残留量较低。

    当测定值为1.3以上时,为检出。

    测定值与农药残留量正相关,测定值越高时,说明农药残留量越高。

    6.2 最低检出浓度

    本方法最低检出浓度见表1。

    内容仅供参考